Тешка и хидрофобна синтеза пептида

Тешка синтеза пептида|Прилагођавање хидрофобних пептида|Тешка синтеза пептида|Цлустер Секуенце Синтхесис|Наука{0}}Пептид

Пептидна секвенца превише хидрофобна? Лако агрегирати? Више парова дисулфидних веза? Услуге науке-Тешка синтеза пептида и синтеза хидрофобних пептида специјализоване су за све врсте „не могу то да урадим“. 20 година искуства, специјални системи растварача, стабилна испорука. Слободно нас контактирајте.

Које врсте пептида се сматрају "тешким"?
Пошто се бавим синтезом пептида већ 20 година, видео сам све врсте тешких пептида. Када нам дођу купци, већ су питали неколико компанија, а одговор је или „Не могу“ или „Пробајте, нема гаранције“.

Пептид са јаком хидрофобношћу: трансмембрански регион, сигнални пептид, хидрофобна аминокиселина, када се синтетише, биће спојен заједно на смоли, а амино киселина иза њега неће моћи да уђе.
Пептиди који се лако агрегирају, као што су амилоидни и антимикробни пептиди, нагомилавају се када се синтетишу и зачепљују колону када се пречишћавају.
Пептиди са више парова дисулфидних веза: више од три пара, један погрешан корак у редоследу упаривања и цео молекул је уништен.
Дугачак пептид: више од 60 аминокиселина, сваки корак приноса се смањује, и на крају ништа не остаје.
Комплексна комбинација модификација: фосфорилација, флуоресценција, циклизација и услови који се међусобно боре.
Можемо их све узети, и то није „покушати“, већ „имати план“.

1. Хидрофобни пептиди: са специјализованим системима растварача
Тешкоћа хидрофобних пептида лежи у чињеници да се не могу растворити у конвенционалним растварачима, а када се синтетизују, пептидни ланац се „скупља“ на смолу, што онемогућава аминокиселине иза њега да уђу.

Наше решење:
Специјална комбинација растварача: ДМФ, НМП, ДЦМ мешани систем, плус мало течног средства за ослобађање, тако да се пептидни ланац одржава растегнутим.
Оптимизација температуре: неке реакције су боље на 40 степени од собне температуре, неке се морају спустити на 0 степени, испробали смо их једну по једну.
Избор смоле: Користите смолу високе растворљивости за хидрофобне пептиде да бисте оставили довољно простора за пептидне ланце.
Солубилизоване етикете: Ако не можете, додајте хидрофилну етикету и одрежите је након синтезе.

Прави случај: 35аа трансмембрански пептид, хидрофобне аминокиселине чине 70%, купац је тражио три компаније не може да се уради. Променили смо систем растварача и додали етикету за солубилизацију, на крају је чистоћа била 92%, а купац је глатко урадио студију структуре.

2. Више парова дисулфидних веза: нема среће, стратегија
Што је више дисулфидних веза, теже их је упарити. Два пара су у реду, али три или више пара, и један погрешан корак и све је готово.
Наша стратегија:
Ортогонална заштита: Цис се може отворити и упарити у корацима користећи различите заштитне групе, као што су Трт, Ацм, тБу.
Оптимизација услова оксидације: ваздушна оксидација, оксидација глутатиона, оксидација јода, различите методе за различите пептиде.
Средњи КЦ: Након сваког пара, узмите узорак за МС и потврдите упаривање пре него што наставите.
МС/МС потврда (опционо): коначни раскид-са секундарном масеном спектрометријом да се види где су дисулфидне везе заправо повезане.

A real case: A conotoxin peptide containing four pairs of disulfide bonds was rejected by many companies. We designed a four-step oxidation strategy, which took six weeks, and delivered >90% чистоће, правилно упарене дисулфидне везе, а кристална структура је накнадно решена од стране купца.

3. Пептиди склони агрегацији{1}}: синтетизују се током одбране
Неки пептиди природно воле да се агрегирају, као што су амилоидни протеин и антибактеријски пептид. Почињу да се агрегирају када се синтетишу, блокирају колону када се пречисте и не могу се растворити када су у руци.
Наше решење:
Псеудопролин: Псеудопролин се уводи у Сер/Тхр позицију да поремети тенденцију агрегације и да се поново промени након синтезе.
Сегментна синтеза: Пептиди који су превише полимеризовани се исеку на неколико сегмената и синтетишу одвојено, а затим поново споје на крају.
Оптимизација услова пречишћавања: висока температура, кисели пХ, додавање органских растварача да би се пронашли услови који га чине не-полимеризирајућим.

4. Комплексне комбинације модификатора: услови без борби
Неки пептиди имају више захтева: фосфорилацију, флуоресцентно обележавање и циклизацију. Ове модификације могу бити у сукобу једна са другом -, на пример, фосфорилација је кисело-фобична, флуоресцентно обележавање је светло-фобично, а циклизација захтева специфичан пХ.
Наш приступ:
Дизајн стратегије очувања: које обрезивање прво урадити, које касније, дизајнирано унапред.
Ортогонални услови: Услови сваког корака реакције не утичу на већ направљене модификације.
Средњи КЦ: Након сваког корака модификације, узмите узорак да бисте се уверили да је исправно урађено пре него што наставите.

5. Чистоћа: У зависности од тога шта радите са њим

Сваки пептид је праћен ХПЛЦ и МС извештајем, чинећи податке о чистоћи транспарентним.

1. Радимо ово већ 20 година
Тешка синтеза пептида није нешто што свако може да уради. Током година, обрадили смо много тешких пептида: трансмембранске протеине, вирусне фузионе пептиде, конотоксине, амилоидне протеине, антимикробне пептиде, итд. Имамо добру идеју о томе које секвенце су подложне проблемима и који услови могу да их спасу. Бар не морате да испробате сваки од њих ако дођете код нас на тешку и хидрофобну синтезу пептида.

2. Није „покушај“, већ „имај програм“.
Многе компаније узимају тешке пептиде и кажу: "Покушаћемо, али не гарантујемо". Не играмо тако. Пре него што прихватимо поруџбину, проценићемо секвенцу, колики је удео хидрофобних амино киселина, да ли постоји нека позната тенденција агрегације, колико парова дисулфидних веза и да ли је модификација сложена или не. Након евалуације, рећи ћемо вам: која је стопа успешности и колико дуго траје циклус.

Ми не примамо наређења која не могу да се изврше, и морамо да предамо наређења која смо примили.

3. Специјализовани системи растварача за хидрофобност
Хидрофобни пептид је наша јача страна. Ако се конвенционални растварач не може растворити, променићемо растварач; ако конвенционална температура не реагује, ми ћемо подесити температуру; ако конвенционална смола не издржи, променићемо смолу. Ту је и етикета за солубилизацију као повратни излаз.

4. Више парова дисулфидних веза, корак-по-корак
Ако постоји више од три пара дисулфидних веза, ми ћемо предузети приступ-по-корак: први корак је да заштитимо А и отворимо први пар; заштити Б и отвори други пар; заштити Ц и отвори трећи пар. Након сваког корака, узимамо узорке за МС и потврђујемо упаривање пре него што наставимо. Коначно, МС/МС ће бити покварен и верификован, а подаци ће вам бити дати без вашег нагађања.

5. Контрола квалитета: подаци на сваком кораку
Контрола квалитета тешких пептида треба да буде пажљивија:
Средњи КЦ: После сваког фрагмента и сваког корака модификације, прво измерите чистоћу и молекулску тежину.
Крајњи производ: ХПЛЦ за чистоћу, МС за молекулску тежину.
Тест растворљивости: Наведите препоручене раствараче и методе солубилизације, тако да не добијете пептиде који се не растварају.
Радећи тешку и хидрофобну синтезу пептида, подаци говоре сами за себе, сваки корак се може пратити.

• Облик испоруке: лиофилизовани прах, епрувете за центрифугирање или бочице.
• Пратећа документација: ЦОА (ХПЛЦ профил + МС спектар), извештај о синтези (опционо).
• Опциони тестови: садржај пептида, ендотоксин, влага, састав аминокиселина, тест растворљивости.
• Прилагођено паковање: порционисање и обележавање према вашим захтевима.
• Сваки тежак и хидрофобни производ синтезе пептида се прегледа како би се осигурало да је редослед тачан и да је чистоћа на стандардном нивоу пре него што се пошаље.

Без обзира да ли су вас други одбили или не можете то да урадите у сопственој лабораторији, можете разговарати са нама. Ако тражите научни-пептид за тешку и хидрофобну синтезу пептида, барем не морате да покушавате један по један.

треба да ми кажеш:
Секвенца пептида (или информација о циљању)
Да ли вам је неко други то урадио раније? Шта је резултат?
Колико (милиграми)
захтеви за чистоћом

када то желиш?

Дајте вам процену изводљивости и понуду програма у року од 24 сата.